2012年公卫执业医师实践技能考试辅导:化学发光免疫分析的类型

来源:医师实践技能师    发布时间:2013-03-08    医师实践技能师辅导视频    评论

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  化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型:

  (一)化学发光酶免疫测定

  化学发光酶免疫测定(CLEIA)是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大,具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶,发光底物为dioxetane磷酸酯,固相载体为磁性微粒。

  (二)化学发光免疫测定

  化学发光免疫测定(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物,在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。

  用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件:

  1.能参与化学发光反应。

  2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。

  3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。

  4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。

  鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。

  (三)微粒子化学发光免疫分析

  该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小,其直径仅1.0μm,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:(1)竞争反应:用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。(2)双抗体夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。

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