提供一种星型胶质细胞的纯化培养方法：

　　1. 分离大鼠胚胎（16-18周）新皮层，置于L-15（或Hank‘s平衡盐/DMEM溶液，无Hepes）培养基中，除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层组织。

　　2. 用解剖刀将其切成1mm3大小的组织块。

　　3. 用1ml枪头转移250μl胶原酶储存液（1.33%，溶于L-15中）到1ml的L-15（或D-MEM）中。每2只鼠脑组织块使用1-1.5ml稀释胶原酶液。

　　4. 37℃水浴中孵育30min.来源:考试大网

　　5. 1000rpm（大约230g）中离心5min，或3000rpm（大约2000g）中离心1min.

　　6. 去上清。来源：www.examda.com

　　7. 在含EDTA-CMF的溶液中重悬细胞，并与胰蛋白酶以1：4～1：10比例混合。可以根据观察到的细胞消化的情况，适当调整两者的比例。

　　8. 加入胰蛋白酶的抑制剂和DNase溶液，混合5分钟。

　　9. 1000rpm（大约230g）中离心5min，或3000rpm（大约2000g）中离心1min.

　　10.去上清。加入500μl D-MEM-BS.

　　11.轻轻吹打成单细胞悬液，开始用5ml枪头吹打10次，在需要时用18-gauge的针头吹打。（ 注意：不要产生气泡。）200目/300目尼龙网过滤。

　　12.将细胞转移到含10%FCS-DMEM的培养瓶中，培养密度为2X106/25cm2培养瓶，4～6 X106/75cm3培养瓶。在37.2℃，37.5%中培养。

　　13.第2天换液，以后每隔3天换液。

　　14.7-10天，细胞发生融合。www.Ｅxamda.CoM

　　15.细胞融合后，将瓶盖用封口膜密封好，在轨迹摇床上培养，旋转速度以不产生气泡为宜。37℃振摇过夜。细胞注意避光。

　　16.去上清，加入新鲜10%FCS-DMEM.

　　17.加入200μl 1mM的阿糖胞苷/10ml培养基。在37.2℃，37.5%中培养孵育48小时以消除分裂的细胞。

　　18.换用新鲜10%FCS-DMEM，孵育恢复24小时。

　　19.重复17-18步骤，消除所有的分裂细胞。

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