病原学检查（补充件）
　　A1 血液检查
　　A1.1 厚血膜法
　　A1.1.1 血片制作：于晚9时至翌晨2时，以酒精棉球消毒耳垂（或指端）待干，用三棱针快速深刺，轻挤出血液，取血3大滴，约等于60μL，置于已编号的清洁载玻片上，涂成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形或长方形厚血膜（约长3cm、宽1.5cm），平放于有盖的玻片盒内，以防落灰或虫吃。
　　A1.1.2 血片染色：次日，将经自然干燥的血片放入清水中溶血5～10min，至血膜呈乳白色，取出晾干，甲醇固定，染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色，鉴定虫种及保存宜用吉氏液或苏木素染色。
　　A1.1.2.1 硼砂美蓝染色法：取美蓝2g，硼砂3g，置研钵内，边研边加水，待溶解后冲洗入瓶中，加蒸馏水100mL配成原液，过滤后放置备用。染色时取原液5mL加清水配成5％稀释液，染3～5min，使血膜呈天蓝色，然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。
　　A1.1.2.2 吉氏染色法：染液由吉氏粉0.5g，中性甘油25mL及甲醇25mL配成。先置染粉于研钵内，加少量甘油充分研磨，边研边加，至甘油加完为止，然后倾入100mL玻塞瓶内，用甲醇小量多次洗涤甘油染液倾入瓶内，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55～60℃温箱内24h或室温下3～5天，即为原液，放置愈久染色效果愈佳，临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约1min，然后滴加10％染液（原液加清水稀释配成）染45min，用蒸馏水轻轻冲洗。
　　A1.1.2.3 德氏苏木素染色法；染液由A液即铵明矾饱和液（铵明钒20g、蒸馏水100mL）；B液（苏木素结晶1g加纯酒精10mL）；C液（甘油25mL加甲醇25mL）配成。将B液逐滴加入A液中，倒入一不盖紧的容器内，置于空气流通处，经2周至1个月使其充分氧化，过滤后加入C液，密封备用。血片溶血固定步骤同前。用上述染液染10～20min，用0.05％～0.1％稀盐酸脱色片刻，流水冲洗至血膜呈蓝色。
　　A1.1.3 血片镜检：将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝蚴并计数，根据微丝蚴的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征，予以识别。在高倍镜下观察微丝蚴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构。必要时需要用油镜作进一步鉴别。
　　A1.2 微丝蚴浓集法
　　A1.2.1 改良蒸馏水法：取静脉血1mL（取血时间同A1.1），置于盛有0.4mL3.8％枸椽酸钠的离心管内，混匀后加蒸馏水8～10mL，反复摇匀，待红细胞溶解后经每分钟3000转离心3～5min，倾去上液，加0.05mol/L氢氧化钠8～10mL，按住管口，用力振荡数次，放置5～10min，使纤维蛋白凝块迅速溶解，再离心，吸除上清液，将沉渣涂片，待干、染色、镜检。
　　A1.2.2 微孔膜过滤法：将已编号的直径25mm、孔径5μm的微孔薄膜经蒸馏水漂洗后装入过滤器内，滤膜下垫一张同样大小经生理盐水润湿的滤纸。用注射器取静脉血1mL（取血时间同A1.1），加5％构椽酸钠0.1mL抗凝，吸入10％聚氧乙烯脂肪醇硫酸钠［或可用2％吐温80、0.1％碳酸氢钠或10％聚氧乙烯脂肪醉硫酸钠（ES）］溶液9mL，混匀后，去针头，直接插入过滤器，缓慢推动注射器，使已溶血的血液通过滤膜，以10mL生理盐水洗涤滤膜3次。开启过滤器，取出薄膜，自然晾干后，置热苏木素中染色5min，水洗，待干，镜检。
　　A2 淋巴液、鞘膜积液、乳糜尿内微丝蚴的检查
　　A2.1 淋巴液、鞘膜积液（或其他抽出液）：直接涂片或用生理盐水稀释10倍离心后检查沉渣。液体蛋白含量高而呈胶状易凝者，加抗凝剂后检查。
　　A2.2 乳糜尿（或乳糜积液）：取乳糜尿4mL于试管中，加乙醚2mL，混合振摇，使乳糜中脂肪充分溶解，弃去上层脂肪，加水稀释10倍后离心检查。
　　A3 活体组织检查
　　A3.1 检查淋巴管、淋巴结内成虫：将手术取出的结节，用大头针固定于木板或软木板上，分离结节周围组织，仔细将病变的淋巴管壁切开，分离内容物，取出干酪样脓样物检查。如于结节出现2周以后切除、解剖，则管内脓样物可能已纤维化。脓样物内含大量巨噬细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞及夏雷晶体。将干酪样物或纤维组织移至玻片上，加数滴生理盐水，然后用解剖针将外层组织分离，即可见被包围的成虫。时间较久者发生粘连，虫体成碎段，不易将虫体与组织分离，则可用一针将包围的组织固定，另一针将虫体沿其长轴向一端轻移，或将组织移至盛有生理盐水的培养皿中，使虫体半浮，较易分离。但如结节形成较久，则不易取得完整的成虫。成虫或虫段可保存于甘油酒精（70％酒精95mL，甘油5mL）中供鉴定。
　　A3.2 病理组织学检查：切下可疑的淋巴结、淋巴管结节或其他组织，用10％中性甲醛固定1～2天，移至70％酒精中作病理切片。在切片中除可发现丝虫成虫外，尚可见到嗜酸粒细胞、网状内皮细胞、淋巴细胞、浆细胞、纤维母细胞、异物巨细胞、肉芽肿、假结核、纤维组织增生、淋巴管周围炎、管腔内肉芽组织增生形成栓塞或息肉状阻塞管腔等病理变化。在切片中所见结构清楚的雌虫体内的微丝蚴体核清晰，所在淋巴管壁有少量浆细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润，而无纤维素沉积或肉芽肿形成者，则成虫可能为活虫。如虫体周围有较多的嗜酸粒细胞和散在的组织，虫体被炎细胞包绕形成肉芽肿，纤维化后形成纤维化结节，或结节内虫体已钙化，则均为死虫。如出现中性粒细胞浸润、渗出，内膜内皮细胞肿大、增生，则为继发性细菌感染。考试大收集整理

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