2010年免疫检验辅导：单克隆抗体的制备技术

　　利用杂交瘤技术制备单克隆抗体（McAb）基本原理是根据三个原则：（1）淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说；（2）杂交瘤细胞保持双方亲代细胞特性化；（3）然后大量培养增殖，制备所需的McAb。

　　一、单克隆抗体的产生

　　1. 动物体内诱生方法：目前McAb治疗用或体外诊断用的多数尚采用这一方法制备。先在小鼠腹腔注射液体石蜡或福氏不完全佐剂，一周后将杂交瘤细胞悬液注射腹腔，1～2周后，无菌抽取腹水，离心取上清液即可。

　　2.体外培养法：这是实验室制备的方法。将杂交瘤细胞置培养瓶中培养，待培养液颜色改变或细胞过多开始死亡时，收集上清液，离心去掉碎片及细胞即可。另一种是杂交瘤细胞高密度培养法。

　　二、单克隆抗体的纯化及鉴定

　　目前常用的纯化方法有盐析、凝胶过滤、离子交换层析和辛酸提取等方法。

　　单克隆抗体性质鉴定方法如放免测定、补体介导溶血试验、ELISA、免疫酶、玫瑰花结形成试验等，最常用的为ELISA方法，一般先作定性试验，如阳性，进一步作定量检测。

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